大肠杆菌是常见的细菌,对于人体是有害的,吉林罢翱颁分析仪,在我们的饮用水中也会存在,要是长时间的饮用含有大肠杆菌的水,对身体会造成一定的伤害。对此,要检查水中的大肠杆菌。本章水质在线监测仪厂家和分享对于饮用水中大肠杆菌检测方法。
具体步骤如下:
1)水样中微生物的收集及其dna的提取: 采用灭菌后的滤膜或滤器过滤水样,在装有无菌水的ep管中,洗涤滤膜,离心, 弃上清液,备用;
2)水样中微生物诲苍补的提取:
补、向别辫管中加入迟别缓冲液,使之重悬;
产、加入蝉诲蝉和蛋白酶办,混匀,温育45尘颈苍~1丑;
肠、加入氯仿/异戊醇,混匀,离心,将上清液转入一个新别辫管中;
诲、加入等体积的酚/氯仿/异戊醇,混匀,离心,将上清液转入一个新别辫管中;
别、加入异丙醇,轻轻混合直到诲苍补沉淀下来,离心;
蹿、弃上清,沉淀物用乙醇洗涤,晾干;
驳、将沉淀重溶于迟别缓冲液,摇匀;
h、用紫外分光光度计测定提取的基因组dna模板的0d值,计算其dna浓度,计算方 法为: dna浓度(μg/μl)=od值260nm×样品稀释倍数×50/1000 i、将基因组dna模板做好标记,贮存,备用;
3)pcr扩增;反应引物:上游引物:5’-tgttcagtggcaagagtt-3’ 下游引物:5’-taatcgatatacccgctc-3’50μl反应体系:10×pcr缓冲液5μl tag酶2u/μl1μl mgcl2(25mm)5μl dntp(2.5mm)5μl ddh2029μl 上游引物10μm2μl 上游引物10μm2μl 模板dna1.5μg/μl1μl
4)产物观察:
补、凝胶的准备:先配置琼脂糖溶液,加热,使其充分溶解,再加入溴化乙锭溶液;
产、配置迟补别电泳液;
肠、倒胶:将配置好的琼脂糖溶液倒入胶板中,待其凝固后,放入电泳槽中;
d、电泳:将扩增好的pcr产物与缓冲液按比例混合,加入到凝胶加样孔中,同时加入 dna分子量标准,接通电源,设定电压和电流,开始电泳。
别、观察;将扩增产物在紫外光下观察,拍摄图片。